轉染試劑是一種適合于把質粒或其它形式的核酸,以及核酸蛋白復合物轉染到培養的真核細胞中的陽離子脂質體轉染試劑。

　　轉染試劑優點

　　1、轉染效率高，重復性好，操作簡單。

　　2、無明顯細胞毒性，用 轉染細胞后，大多數細胞72小時內不更換培養液無明顯細胞毒性。

　　3、 轉染試劑對于貼壁細胞和懸浮細胞都適用，并且可以用于穩定表達細胞株的篩選。

　　使用說明

　　1. 細胞培養：以293T細胞為例，轉染前一天(20-24小時) ~0.4×106 細胞(具體的細胞數量據細胞大小和細胞生長速度而定)鋪到六孔板內，使第二天細胞匯合度（confluent）能達到約50%~70%。

　　2. 在進行下述轉染步驟前，把六孔板每孔內換成新鮮細胞培養液。培養液的體積約為2 ml。

　　注：其他培養介質培養液體積參見《各種培養介質下 轉染DNA詳表》，抗生素、Glutamine等對 轉染并無影響。如果LipoFiter對目的細胞毒性較大，轉染試劑建議去除轉染體系內的抗生素。

　　3. 把 脂質體轉染試劑輕輕混勻。

　　4.對于待轉染的六孔板中一個孔的細胞，取一只潔凈無菌離心管，加入4 mg質粒DNA（其他培養介質DNA用量參見附表）到250 ml DMEM溶液，用槍輕輕吹打混勻。

　　5. 取另一只潔凈無菌離心管，加入250 ml DMEM溶液，再加入10 ml  （其他培養介質 用量參見附表），用槍輕輕吹打混勻,室溫放置5分鐘。

　　6. 將步驟4與5中的DNA溶液與 溶液混合，用槍輕輕吹打混勻。注意：不可Vortex或離心。

　　7. 室溫孵育20分鐘。有可能出現絮狀沉淀物，屬正常現象，不會影響轉染效率。

　　8. 轉染試劑無論是貼壁細胞還是懸浮細胞，均把500 ml  -DNA混合物全部加入六孔板的一個孔內。加入時注意盡量均勻加入到整個孔內，隨后輕輕“8”字搖擺混勻。

　　注：針對貼壁細胞，如上述所說，只需將 -DNA復合物加入細胞中孵育6小時再換液即可。若是轉染懸浮或半懸浮細胞，則推薦通過平角離心轉染法，即將適量的 -DNA復合物加入細胞培養皿后（步驟8），封口膜封好，放入平角離心機，低速（200 g）離心1.5 小時，然后放入培養箱中正常培養6小時再換液即可。

　　9. 細胞培養箱內培養6-12小時后，去除含有 -DNA的無血清培養液。每孔加入2 ml新鮮含血清的細胞培養液繼續培養。

　　注：通常 -DNA混合物和細胞一起孵育6小時已經足夠產生較高的轉染效率。轉染試劑大多數細胞和 -DNA一起培養長達72小時未見明顯細胞毒性。但轉染后6小時更換新鮮培養液對于一些生長非常快速的細胞有助于提高轉染效率。對一些比較易于轉染的細胞如HEK-293T細胞，換液可視細胞生長狀況而定，無需為提高轉染效率而換液。

　　10. 轉染后續處理：

　　1) 對于基因表達，再培養24-40小時后即可檢測轉染效果，如轉染帶GFP或者其他熒光基因的表達載體，可用熒光顯微鏡觀測細胞轉染效率。

　　2) 轉染試劑用于篩選穩定表達細胞株，則在轉染后24小時即可加入適當的篩選藥物，例如G418或Puromycin（嘌呤霉素）等，進行穩定表達細胞株的篩選。